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Notas importantes: Faça um frasco de cada componente A e B à temperatura ambiente antes de iniciar o experimento. Solução padrão AST (100 U / mL): Adicione 100 L de tampão DPBS ao controle positivo AST (componente D) para obter 100 U / mL de solução padrão AST. Por conveniência, use o Planejador de Diluição em Série: https: // www. com / tools / serial-dilution / 13800Adicionar 3 L de 100 U / mL de solução padrão AST em 997 L de tampão DPBS com 0. 1% de BSA para gerar 300 mU / mL de solução padrão AST (AST7). Pegue 300 L de 300 mU / mL da solução padrão AST para realizar diluições em série 1: 3 para obter diluições em série do padrão AST (AST6 - AST1). Nota: Os padrões AST são apenas para controle positivo, e não devem ser considerados como um padrão de quantificação para atividade enzimática. Solução NAD (100X): Adicione 100 L de ddH2O ao frasco de NAD (Componente C). Solução de Mistura de Enzimas AST: Adicione 10 mL de Tampão de Ensaio AST (Componente B) no frasco de Mistura de Enzimas AST (Componente A) e misture bem. Solução de trabalho AST: Adicione o frasco inteiro da solução 100X NAD (de 1) à solução AST Enzyme Mixture (de 2) para ter solução de trabalho AST. Nota: Esta solução de trabalho AST é suficiente para duas placas de 96 poços. É instável à temperatura ambiente e deve ser usado dentro de 2 horas. Alternativamente, pode-se fazer uma solução de estoque de Mistura de Enzima AST 50X adicionando 200 L de H2O no frasco do Componente A, e então preparar a solução de trabalho AST misturando a solução estoque com tampão de ensaio (Componente B) e solução NAD 100X proporcionalmente.
Notas importantes: Faça um frasco de cada componente A e B à temperatura ambiente antes de iniciar o experimento. Solução padrão AST (100 U / mL): Adicione 100 L de tampão DPBS ao controle positivo AST (componente D) para obter 100 U / mL de solução padrão AST. Por conveniência, use o Planejador de Diluição em Série: https: // www. com / tools / serial-dilution / 13800Adicionar 3 L de 100 U / mL de solução padrão AST em 997 L de tampão DPBS com 0. 1% de BSA para gerar 300 mU / mL de solução padrão AST (AST7). Pegue 300 L de 300 mU / mL da solução padrão AST para realizar diluições em série 1: 3 para obter diluições em série do padrão AST (AST6 - AST1). Nota: Os padrões AST são apenas para controle positivo, e não devem ser considerados como um padrão de quantificação para atividade enzimática. Solução NAD (100X): Adicione 100 L de ddH2O ao frasco de NAD (Componente C). Solução de Mistura de Enzimas AST: Adicione 10 mL de Tampão de Ensaio AST (Componente B) no frasco de Mistura de Enzimas AST (Componente A) e misture bem. Solução de trabalho AST: Adicione o frasco inteiro da solução 100X NAD (de 1) à solução AST Enzyme Mixture (de 2) para ter solução de trabalho AST. Nota: Esta solução de trabalho AST é suficiente para duas placas de 96 poços. É instável à temperatura ambiente e deve ser usado dentro de 2 horas. Alternativamente, pode-se fazer uma solução de estoque de Mistura de Enzima AST 50X adicionando 200 L de H2O no frasco do Componente A, e então preparar a solução de trabalho AST misturando a solução estoque com tampão de ensaio (Componente B) e solução NAD 100X proporcionalmente.